Download or read book Sperm Mediated Gene Transfer for generation of transgenic jundi s Rhamdia quelen written by and published by . This book was released on 2004 with total page pages. Available in PDF, EPUB and Kindle. Book excerpt: Várias metodologias de inserção de DNA exógeno em células eucarióticas vêmsendo estudadas nas últimas duas décadas. Em peixes, a técnica mais estudadaaté o momento é a microinjeção, que proporciona a inserção de fragmentosgênicos de interesse em zigotos. No entanto esta metodologia apresenta diversosfatores negativos: consome tempo e trabalho, exige qualificação técnica, háelevada mortalidade de embriões, a percentagem de integração é freqüentementebaixa, a opacidade dos ovos de peixes não permite a visualização do pró-núcleo, além da membrana coriônica ser muito resistente em muitas espécies de peixestornando-se uma barreira à microinjeção. Uma alternativa de otimização doprocesso de inserção de DNA exógeno, teoricamente consiste na transfecçãomassal de células espermáticas pré fertilização in vitro. A transferência gênicamediada por espermatozóides (SMGT) vem sendo utilizada no estudo e geraçãode diversas espécies de animais transgênicos, inclusive peixes. Algumasferramentas como eletroporação, diferencial osmótico e incubação espermáticasão alternativas que podem potencializar a SMGT em peixes. Este estudo teve porobjetivo avaliar o potencial espermático do jundiá (Rhamdia quelen) submetido adiferentes tratamentos de inserção de DNA exógeno para gerar jundiástransgênicos. Para atingir este objetivo utilizou-se dois vetores pCMV-GFP epcBA-GFP, linearizados, em 5 tratamentos propostos: desidratação/reidratação (DR); eletroporação (E); desidratação/reidratação/eletroporação (DRE);incubação com plasma seminal (INC) e incubação sem plasma seminal (INCSP).Como controle sêmen diluído em solução isotônica sem DNA exógeno. Paraavaliar o potencial espermático foram mensurados atividade espermática (AT), tempo de permanência em atividade (TPA), integridade de membrana efertilização in vitro (FIV) através das TXFIV (taxa de fertilização in vitro) e TXECLO(taxa de eclosão). Para avaliar a expressão da GFP os animais foramanestesiados e observados em microscopia de fluorescência. As análisesestatísticas demonstraram que houve efeito significativo (P