Download or read book Imagerie intravitale par microscopie biphotonique written by Pascale Vérant and published by . This book was released on 2006 with total page 180 pages. Available in PDF, EPUB and Kindle. Book excerpt: Parmi les techniques optiques d'étude du vivant, la microscopie de fluorescence par excitation à deux photons permet une imagerie de fluorescence tridimensionnelle en profondeur dans les tissus biologiques avec une haute résolution temporelle (de l'ordre de la ms) et une haute résolution spatiale (micrométrique). En collaboration avec une équipe de biologistes de l'INSERM, nous avons utilisé cette technique pour étudier in vivo les effets sur la microvascularisation corticale de la souris d'un nouveau protocole de radiothérapie réalisé au Synchrotron de Grenoble et destiné au traitement des tumeurs cérébrales: la radiothérapie par microfaisceaux. Nous avons imagé la microvascularisation corticale de la souris jusqu'à 500 !-lm de profondeur dans le cortex, à différents temps après irradiation et pour deux doses (312 et 1000 Gy), en injectant simultanément en intraveineuse deux colorants fluorescents (300 et 70000 Da) pour détecter une éventuelle perméabilisation dépendant de la taille des molécules. Aucune modification morphologique ni perméabilisation importante des capillaires n'ont été décelées, notamment au niveau du passage des microfaisceaux, témoignant d'un faible impact de l'irradiation sur la microvascularisation saine. Nous avons parallèlement développé une méthode de mesure in vivo du volume sanguin cérébral qui ne nécessite pas d'analyse morpho métrique et est donc rapide ainsi qu'une technique d'étude de la perméabilité vasculaire.

Download or read book Sondes fluorescentes vinyl triph nylamines optimis es pour la microscopie biphotonique written by Blaise Dumat and published by . This book was released on 2012 with total page 0 pages. Available in PDF, EPUB and Kindle. Book excerpt: L'avènement de la microscopie biphotonique et des techniques dites de « super-résolution » ont permis d'améliorer les performances de la microscopie de fluorescence et de l'appliquer à l'imagerie intravitale et à l'analyse des tissus biologiques. Ces techniques requièrent néanmoins l'emploi de sondes aux propriétés optiques et biologiques optimisées.Plusieurs séries de colorants cationiques basés sur le motif vinyl-triphénylamine (TP) ont été développés pour le marquage d'ADN. Ces fluorophores rouges ou jaunes dont l'émission de fluorescence est commutée par l'interaction avec l'ADN sont des ligands de petit sillon de l'hélice B et possèdent des sections efficaces d'absorption à deux photons élevées.Les TP marquent l'ADN du noyau des cellules fixées ou en apoptose avec une intensité et un contraste élevés. Elles sont non-cytotoxiques, photostables et sont perméables à la membrane cellulaire. L'optimisation des propriétés a permis d'obtenir la TP-2Bzim, qui possède une brillance biphotonique parmi les plus élevées rapportées dans la littérature pour des molécules de faible poids moléculaire (383 GM) et permet une détection en microscopie biphotonique à basse concentration et à faible puissance d'excitation. En cellules vivantes, les TP sont localisées dans les mitochondries mais, sous excitation mono- ou bi-photonique constante, elles déclenchent l'apoptose de la cellule et se relocalisent dans le noyau. Le phénomène peut être imagé par fluorescence, et les TP pourraient donc être employées comme photosensibilisateurs théranostiques.Enfin, une stratégie de synthèse pour fonctionnaliser la TP-2Bzim a été développée. Elle a ainsi pu être couplée à des oligonucléotides et à un PNA pour la détection d'hybridation par fluorescence et à l'acide folique et à la spermidine pour le ciblage de cellules cancéreuses.

Download or read book Advances in Intravital Microscopy written by Roberto Weigert and published by Springer. This book was released on 2014-11-12 with total page 425 pages. Available in PDF, EPUB and Kindle. Book excerpt: This is the first book entirely dedicated to Intravital Microscopy. It provides the reader with a broad overview of the main applications of Intravital Microscopy in various areas of the biomedical field. The book contains accurate descriptions of the state of the art methodologies used to image various organs at different level of resolution, ranging from whole tissue down to sub-cellular structures. Moreover, it is an extremely valuable guide to scientists that want to adopt this powerful technique and do not have experience with animal models and microscopy.

Download or read book Imagerie 3D r solue en temps pour l aide au diagnostic m dical written by Ariane Deniset-Besseau and published by . This book was released on 2008 with total page 156 pages. Available in PDF, EPUB and Kindle. Book excerpt: L'utilisation de la microscopie confocale et biphotonique de fluorescence est de plus en plus répandue dans le domaine biomédical. En effet, l'imagerie d'intensité, de spectre et de durée de vie de fluorescence permettent de détecter, quantifier et imager les composants fluorescents intrinsèques d'un milieu biologique ainsi que les sondes extrinsèques. Au cours de ce travail de thèse, nous avons, dans un premier temps, développé et optimisé un nouveau système de microscopie de fluorescence, appelé microscope multiphoton multipoint, améliorant la vitesse d'acquisition du microscope de fluorescence biphotonique traditionnellement utilisé pour l'imagerie de fluorescence résolue en temps. Pour cela, un système optique créant une matrice de 64 faisceaux excitateurs à partir d'un unique faisceau laser a été conçu. Nous avons également mis au point, durant ce travail, de nouvelles méthodes permettant d'améliorer le diagnostic médical. Comme les modes de détection non-invasifs des cancers du col de l'utérus actuellement en place, comme la cytologie, manquent de sensibilité pour permettre d'établir de manière fiable un diagnostic sur des cas dits indéterminés, nous avons utilisé la fluorescence intrinsèque des échantillons anatomapathogiques comme facteur de contraste pour améliorer le diagnostic précoce. Enfin, une démarche expérimentale similaire a été entreprise pour déceler avant traitement chez un patient une résistance aux polychimiothérapies utilisés pour traiter les cancers de vessie comme le M.VAC. A l'issue de ce travail, nous avons identifié une signature spectroscopique nous permettant de discriminer les cellules résistantes des cellules sensibles à la polychimiothérapie.

Download or read book Imaging from Cells to Animals In Vivo written by Margarida Barroso and published by CRC Press. This book was released on 2020-12-03 with total page 444 pages. Available in PDF, EPUB and Kindle. Book excerpt: This book offers an overview of imaging techniques used to investigate cells and tissue in their native environment. It covers the range of imaging approaches used, as well as the application of those techniques to the study of biological processes in cells and whole tissues within living organisms.

Download or read book Microscopie par g n ration du second harmonique written by Laurent Moreaux and published by . This book was released on 2002 with total page 86 pages. Available in PDF, EPUB and Kindle. Book excerpt: By far the most well known form of non-linear microscopy is based on two-photon excited fluorescence (TPEF), which bas now become a laboratory standard for biological imaging. A lesser known form of this microscopy, however, was used several years prior to the invention of TPEF microscopy, based on the generation of second harmonic light either from surfaces or from endogenous tissue structures. Because of difficulties in signal, second-harmonic generation (SHG) microscopy has gone by relatively unnoticed until only very recently. This work present a detailed experimental and theoretical analysis of the generation of second-harmonic radiation from biological membranes labeled with exogenous markers. We demonstrate that simultaneous second-harmonic generation and two-photon excited fluorescence can be used to image biological membranes labeled with properly designed chromophore. Moreover, we show that spatial resolutions provided by SHG and TPEF microscopies are commensurate, meaning that the two contrast modes can very often be conveniently derived from the same instrument. Based on phased-array antennas model, we derive expressions for the SHG radiation power, angular distribution and polarization dependence in the cases of ideal or non-ideal molecular alignment in the membrane. We define an SHG cross-section similar to that used in two-photon excited fluorescence to allow direct comparison. Despite their similarities, however, SHG and TPEF are fundamentally different phenomena. The first is coherent whereas the second is not. We demonstrate, moreover, that this basic difference provides a unique window into molecular spatial organization which is inaccessible to fluorescence. At least, we present a screening technique to quantify and ascertain the nature of the second-harmonic generation response of chromophores to a trans-membrane electric field. These results are specifically directed to the optimisation of membrane potential response in SHG microscopy.

Download or read book Apports de la microscopie biphotonique l tude du tissu musculaire squelettique et du syst me nerveux written by Gaëlle Recher and published by . This book was released on 2010 with total page 275 pages. Available in PDF, EPUB and Kindle. Book excerpt: Over the last twenty years, two-photon microscopy has gradually emerged in the field of biology, along with other imaging methods. It allows imaging of both fluorophores and endogenous molecules with non linear susceptibility (harmonophores), as myosin, either in thick tissues or in vivo. The first part of this study focused on second harmonic imaging (SHG) of muscle tissues, and showed how sarcomeric SHG intensity profile, which is single peak under physiological conditions, is converted into double peak when the tissue undergoes proteolysis (post-mortem, mechanical and chemical stresses, photodamage). This change in intensity profile is caused by expansion of a central centro-symmetry area which prevents construction of the signal SHG as it propagates through the tissue. Muscle SHG microscopy appears to be an excellent tool for studying multi-scale structural organization of myofilaments within and between myofibrils in different physiological and non-physiological conditions. In the second part of this work, two-photon multiplex microscopy was used to characterize in vivo, the tissue-specific expression of a transgene from the P-nβt-EGFP Xenopus transgenic line. Finally this work shows the wide possibilities offered by two-photon imaging in the field of integrative biology for the study of harmonic or fluorescent sources in thick tissues and even in small animals in vivo.

Download or read book IMAGERIE A HAUTE RESOLUTION EN MILIEU DIFFUSANT PAR TOMOGRAPHIE OPTIQUE COHERENTE ET MICROSCOPIE NON LINEAIRE AVEC EXCITATION A DEUX PHOTONS APPLICATION AU TISSU CEREBRAL written by Emmanuel Beaurepaire and published by . This book was released on 2000 with total page 118 pages. Available in PDF, EPUB and Kindle. Book excerpt: NOUS PRESENTONS LE DEVELOPPEMENT DE NOUVELLES TECHNIQUES D'IMAGERIE OPTIQUE A HAUTE RESOLUTION DANS LES TISSUS BIOLOGIQUES, QUI SONT DES MILIEUX FORTEMENT DIFFUSANTS POUR LES LONGUEURS D'ONDES VISIBLE ET PROCHE INFRAROUGE. LA PREMIERE PARTIE DE CE MANUSCRIT RAPPELLE LES PROPRIETES OPTIQUES CARACTERISTIQUES DES TISSUS ET LES DIFFERENTES APPROCHES EXPERIMENTALES EXISTANTES A CE JOUR POUR L'IMAGERIE OPTIQUE EN PROFONDEUR DANS CES MILIEUX. EN PARTICULIER, NOUS PASSONS EN REVUE LES TECHNIQUES DE MICROSCOPIE FORMANT LE CONTEXTE DE CE TRAVAIL : LA MICROSCOPIE CONFOCALE, LA TOMOGRAPHIE OPTIQUE COHERENTE (OCT) ET LA MICROSCOPIE DE FLUORESCENCE AVEC EXCITATION NON LINEAIRE. UNE ATTENTION PARTICULIERE EST ACCORDEE A LA DESCRIPTION DE L'OCT, A LAQUELLE PLUSIEURS INNOVATIONS ONT ETE APPORTEES DANS LE CADRE CE TRAVAIL. LA PARTIE SUIVANTE DECRIT DEUX APPAREILS CONCUS ET REALISES AU COURS DE CETTE THESE. LE PREMIER A DEMONTRE POUR LA PREMIERE FOIS QU'IL EST POSSIBLE D'INTRODUIRE SUR UN IMAGEUR OCT UN DISPOSITIF DE DETECTION PARALLELE UTILISANT UNE UNE CAMERA CCD, CE QUI ELIMINE D'AVOIR A BALAYER LA SOURCE OU L'ECHANTILLON. LE MICROSCOPE CONSTRUIT SUR CE PRINCIPE EST DECRIT, ET DES IMAGES OBTENUES DANS DES TISSUS VEGETAUX SONT PRESENTEES. LE DEUXIEME APPAREIL A DEMONTRE POUR LA PREMIERE FOIS QU'IL EST POSSIBLE DE COMBINER EN UN SEUL INSTRUMENT UN MICROSCOPE OCT A BALAYAGE ET UN MICROSCOPE DE FLUORESCENCE AVEC EXCITATION A DEUX PHOTONS. CES DEUX MODES DE CONTRASTES ETANT INTRINSEQUEMENT DIFFERENTS, ILS PERMETTENT D'OBTENIR DES INFORMATIONS COMPLEMENTAIRES SUR UN TISSU. PAR EXEMPLE, UNE DOUBLE IMAGE MORPHOLOGIQUE ET FONCTIONNELLE PEUT ETRE ENREGISTREE A PLUSIEURS CENTAINES DE MICRONS DE PROFONDEUR AVEC UNE RESOLUTION MICROMETRIQUE. NOUS DECRIVONS

Download or read book Microscopie illumination structur e et optique adaptative pour l imagerie de fluorescence 3D dynamique written by Pierre Vermeulen and published by . This book was released on 2012 with total page pages. Available in PDF, EPUB and Kindle. Book excerpt: Les récentes avancées en microscopie de fluorescence (augmentation de résolution spatiale, correction des aberrations induites par l'échantillon...) ouvrent de nombreuses perspectives en imagerie biologique. Mais pour que ces techniques se répandent, il est nécessaire de réduire les contraintes qu'elles imposent sur la préparation des échantillons, sur les sondes fluorescentes, sur la complexité de mise en oeuvre ou la cadence d'acquisition. Pendant ma thèse, j'ai travaillé sur le développement et l'amélioration de quelques-unes de ces techniques. Dans un premier temps, deux systèmes d'illumination structurée ont été réalisés dans le but d'accélérer la cadence de réalisation de coupes optiques pour l'observation d'échantillons épais vivants. Une deuxième partie de mon travail a concerné la mise en place d'une nouvelle approche de reconstruction en illumination structurée afin de dépasser la limite de résolution imposée par le microscope. Cet outil permet de réduire le nombre d'images requises pour la reconstruction d'une image super-résolue, ce qui ouvre la voie à une augmentation de la cadence de réalisation de ces images. Un montage d'optique adaptative a également été développé afin de corriger les aberrations introduites par les échantillons épais, permettant une amélioration des capacités d'imagerie en profondeur. L'accent a été mis sur la protection de l'échantillon, grâce à l'utilisation de billes fluorescentes pour déterminer la correction à appliquer sans illuminer l'échantillon. Enfin, un instrument de mesure du rendement quantique de fluorescence dédié à la caractérisation de fluorophores infrarouges a été mis en oeuvre afin de pallier les limitations des méthodes de mesure classiques dans le proche infrarouge

Download or read book Microscopie par diffusion coh rente Raman CARS written by Nadia Djaker-Oudjhara and published by . This book was released on 2006 with total page 149 pages. Available in PDF, EPUB and Kindle. Book excerpt: La microscopie par diffusion Raman Cohérente Anti-Stokes (CARS) est une méthode récente d'imagerie dont le contraste provient des vibrations moléculaires intrinsèques d'une liaison ou d'un ensemble de liaisons chimiques. Cette technique présente l'avantage de s'affranchir de tout marqueur fluorescent qui peut être toxique pour un organisme biologique vivant. Elle permet aussi d'avoir une très grande sensibilité et une forte resolution spatiale, comparable à celle de la microscopie confocale. Le travail de cette thèse, concerne la réalisation d'un microscope CARS, et sa mise en application à différents domaine de l'imagerie bio-médicale. Des études ont été menées démontrant les potentialités de cet outil, ainsi que sa caractérisation dans le domaine spatiale et spectral.