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Book D  veloppement Des M  thodes Bio Analytique Pour L analyse Quantitative Et Qualitative Des Peptides Et Prot  ines Marqu  s Par Le Couplage de la Chromatographie Et la Spectrom  trie de Masse

Download or read book D veloppement Des M thodes Bio Analytique Pour L analyse Quantitative Et Qualitative Des Peptides Et Prot ines Marqu s Par Le Couplage de la Chromatographie Et la Spectrom trie de Masse written by Angela Sarah Holste and published by . This book was released on 2014 with total page 0 pages. Available in PDF, EPUB and Kindle. Book excerpt: This PhD thesis was a Cotutelle between the Université de Pau et des Pays de l'Adour (UPPA) in Pau, France and the Christian-Albrechts University (CAU) in Kiel, Germany. In the course of this international collaboration, bio-analytical methods for the quantitative and qualitative analysis of labelled peptides and proteins were developed, which were based on the hyphenation of chromatography with mass spectrometry. Peptides and protein digests were lanthanide labelled using DOTA-based compounds according to an optimised protocol. Separation on the peptide level was performed using IP-RP-nanoHPLC. Complementary data sets were acquired using MALDI-MS for identification and ICP-MS for quantification. In this context, an online precleaning step was developed and implemented in the nanoHPLC separation routine, which allowed for effective removal of excess reagents. This lead to lowered metal backgrounds during ICP-MS measurements and thus better data interpretability, while guarding peptide recovery at a maximum level. An alternative offline purification using solid phase extraction (SPE) resulted in important peptide losses and can be considered unsuitable for quantitative analysis. Additives to the nanoHPLC eluents, such as HFBA and EDTA were tested and not deemed beneficial for the analysis of normal peptide samples. HFBA can be reconsidered for special application on very hydrophilic peptide species. A set of labelled peptides was developed, which due to application of known quantities could be employed for quick and simple quantification of a low complexity digest sample. In addition this peptide set allowed for the reliable superposition of chromatograms, enabling sample comparability especially for complementary ICP-MS and MALDI-MS data. Experiments for application of fsLA-ICP-MS on MALDI-MS target plates were conducted and showed very promising results. For this purpose, samples that were already identified using MALDI-MS were supposed to be remeasured using fsLA-ICP-MS. First quantification attempts on the modified steel target plate were successful and in the range of expectance. Adjusted parameters for MALDI-MS allowed for proper peptide identifications.

Book Analyse par chromatographie en phase liquide coupl  e    la spectrom  trie de masse d acides amin  s et de petits peptides non d  riv  s dans des matrices agroalimentaires

Download or read book Analyse par chromatographie en phase liquide coupl e la spectrom trie de masse d acides amin s et de petits peptides non d riv s dans des matrices agroalimentaires written by Marine de Person and published by . This book was released on 2005 with total page 280 pages. Available in PDF, EPUB and Kindle. Book excerpt: L'analyse qualitative et quantitative des acides aminés et des petits peptides dans les matrices complexes représente un enjeu indéniable dans de nombreux domaines d'application (agroalimentaire, pharmaceutique, exobiologie, ...). Les méthodes d'analyse que nous proposons dans ce mémoire font appel à la chromatographie en phase liquide couplée à la spectrométrie de masse sans étape de dérivation. La premiere partie du mémoire est consacrée à l'identification et au dosage de petits peptides dans des vins de Champagne. La méthodologie d'analyse est basée sur le couplage de la chromatographie de paire d'ions en milieu acide à la spectrométrie de masse à source electrospray en mode d'ionisation positif. Elle a été optimisée puis validée selon les critères classiques de validation. La seconde partie du mémoire a trait au développement de deux nouvelles méthodes séparatives complémentaires, compatibles avec un mode d'ionisation négatif. La première fait appel à la chromatographie de paire d'ions en milieu alcalin avec des agents d'appariement d'ions volatils (n-alkylammonium) sur silice greffée octadécyle et sur carbone graphitique poreux. La seconde utilise la chromatographie d'interactions hydrophiles sur une phase stationnaire polymérique de type amino. Une validation de ces méthodes a été développée. Enfin, une étude comparative des performances de deux sources d'ionisation de type electrospray associées à des interfaces différentes a été réalisée dans le cadre de l'analyse des acides aminés non dérivés.

Book The Peptides Analysis  Synthesis  Biology

Download or read book The Peptides Analysis Synthesis Biology written by Erhard Gross and published by Elsevier. This book was released on 2012-12-02 with total page 330 pages. Available in PDF, EPUB and Kindle. Book excerpt: The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology: Volume 4: Modern Techniques of Conformational, Structural, and Configurational Analysis is an open-ended treatise that provides comprehensive and critical reviews of important developments in all areas of peptide research including analysis, synthesis, and biology. X-ray structure studies, amino acid analysis, and chiroptical analysis of configuration are discussed, along with solid-phase sequencing and ultramicroanalysis with the aid of fluorescence. This volume is comprised of six chapters and begins with an account of crystal structure analysis on molecules containing 2-12 peptide units, focusing on the variety of intramolecular hydrogen bonds, cis peptide units, and multiple conformation. Conformational changes upon complexation with metal ions are considered, together with the inclusion of solvents as integral parts of a molecular structure. The following chapters explore the conformations of insulin, glucagon, pancreatic polypeptide and related molecules, as well as the molecular biology of these hormones based on crystal structures; the usefulness of chiroptical techniques for determining the absolute configuration of amino acids and small peptides; and ultramicroanalysis of peptides and proteins by high performance liquid chromatography and fluorescence detection. The final chapter looks at the status and future potential of solid-phase sequencing. This book is intended as a reference for specialists, a guide for the novice, and a forum for investigators concerned with research on peptides and proteins.

Book Protein Analysis using Mass Spectrometry

Download or read book Protein Analysis using Mass Spectrometry written by Mike S. Lee and published by John Wiley & Sons. This book was released on 2017-05-26 with total page 282 pages. Available in PDF, EPUB and Kindle. Book excerpt: Presents Practical Applications of Mass Spectrometry for Protein Analysis and Covers Their Impact on Accelerating Drug Discovery and Development Covers both qualitative and quantitative aspects of Mass Spectrometry protein analysis in drug discovery Principles, Instrumentation, Technologies topics include MS of peptides, proteins, and ADCs , instrumentation in protein analysis, nanospray technology in MS protein analysis, and automation in MS protein analysis Details emerging areas from drug monitoring to patient care such as Identification and validation of biomarkers for cancer, targeted MS approaches for biomarker validation, biomarker discovery, and regulatory perspectives Brings together the most current advances in the mass spectrometry technology and related method in protein analysis

Book La quantification cibl  e de prot  ines et peptides par chromatographie liquide coupl  e    la spectrom  trie de masse en tandem

Download or read book La quantification cibl e de prot ines et peptides par chromatographie liquide coupl e la spectrom trie de masse en tandem written by Romain Simon and published by . This book was released on 2012 with total page 0 pages. Available in PDF, EPUB and Kindle. Book excerpt: En recherche clinique ou environnementale, les biomarqueurs protéiques présentent un intérêt croissant. Bien que les immuno-dosages restent les méthodes de référence pour leur quantification, les récentes avancées en spectrométrie de masse (MS) font de cette technique une alternative crédible à l'ELISA. Ce travail apporte quelques éléments méthodologiques pour repousser certaines limitations de la MS. D'abord, deux dosages ont été proposés. Celui réalisé chez G. fossarum représente le premier exemple de dosage de la Vitellogénine chez un invertébré par LC-MS/MS. L'un des défis de la méthode présentée est de doser spécifiquement une protéine dans un organisme dont le génome est majoritairement inconnu. Le second dosage concerne les peptides contenant une méthionine. Nous avons développé un protocole d'oxydation des méthionines afin de s'affranchir du biais lié à leur oxydation partielle. Cette méthode a ensuite été appliquée à une protéine impliquée dans la maladie d'Alzheimer (l'Apolipoprotéine E4) dans une cohorte de 673 plasmas. Ce dosage est à ce jour l'une des plus grandes études réalisées par LC-MS/MS et montre toute la robustesse de cette approche. Enfin, l'influence de la phase mobile sur la sensibilité des dosages de peptides a été étudiée : d'abord en phase inverse, où le méthanol est une bonne alternative à l'acétonitrile ; ensuite en HILIC, où les difficultés liées à l'étude d'ions multichargés en milieu majoritairement organique ont été abordées. Les problèmes liés à la capacité de charge des colonnes ont également été soulevés. La chromatographie HILIC reste prometteuse pour la quantification de peptides puisqu'un facteur dix en sensibilité peut être apporté.

Book Peptide Synthesis and Applications

Download or read book Peptide Synthesis and Applications written by John Howl and published by Springer Science & Business Media. This book was released on 2008-02-02 with total page 263 pages. Available in PDF, EPUB and Kindle. Book excerpt: Hands-on experts describe in step-by-step detail the key methodologies of contemporary peptide synthesis and illustrate their numerous applications. The techniques presented include protocols for chemical ligation, the synthesis of cyclic and phosphotyrosine-containing peptides, lipoamino acid- and sugar-conjugated peptides, and peptide purification and analyses. Additional chapters detail methodologies and instrumentation for high-throughput peptide synthesis, many different applications of peptides as novel research tools and biological probes, and the design and application of fluorescent substrate-based peptides that can be used to determine the selectivity and activity of peptidases. A practical guide to the identification of proteins using mass spectrometric analyses of peptide mixtures is also included.

Book Development of Bio analytical Methods for the Quantitative and Qualitative Analysis of Labelled Peptides and Proteins Via Hyphenation of Chromatography and Mass Spectrometry

Download or read book Development of Bio analytical Methods for the Quantitative and Qualitative Analysis of Labelled Peptides and Proteins Via Hyphenation of Chromatography and Mass Spectrometry written by Angela Sarah Holste and published by . This book was released on 2013 with total page 0 pages. Available in PDF, EPUB and Kindle. Book excerpt:

Book Computational Methods for Mass Spectrometry Proteomics

Download or read book Computational Methods for Mass Spectrometry Proteomics written by Ingvar Eidhammer and published by John Wiley & Sons. This book was released on 2008-02-28 with total page 296 pages. Available in PDF, EPUB and Kindle. Book excerpt: Proteomics is the study of the subsets of proteins present in different parts of an organism and how they change with time and varying conditions. Mass spectrometry is the leading technology used in proteomics, and the field relies heavily on bioinformatics to process and analyze the acquired data. Since recent years have seen tremendous developments in instrumentation and proteomics-related bioinformatics, there is clearly a need for a solid introduction to the crossroads where proteomics and bioinformatics meet. Computational Methods for Mass Spectrometry Proteomics describes the different instruments and methodologies used in proteomics in a unified manner. The authors put an emphasis on the computational methods for the different phases of a proteomics analysis, but the underlying principles in protein chemistry and instrument technology are also described. The book is illustrated by a number of figures and examples, and contains exercises for the reader. Written in an accessible yet rigorous style, it is a valuable reference for both informaticians and biologists. Computational Methods for Mass Spectrometry Proteomics is suited for advanced undergraduate and graduate students of bioinformatics and molecular biology with an interest in proteomics. It also provides a good introduction and reference source for researchers new to proteomics, and for people who come into more peripheral contact with the field.

Book Peptides

    Book Details:
  • Author : Norbert Sewald
  • Publisher : John Wiley & Sons
  • Release : 2015-11-19
  • ISBN : 3527802657
  • Pages : 771 pages

Download or read book Peptides written by Norbert Sewald and published by John Wiley & Sons. This book was released on 2015-11-19 with total page 771 pages. Available in PDF, EPUB and Kindle. Book excerpt: Der "Sewald/Jakubke" ist und bleibt das einzige moderne, auf dem neuesten wissenschaftlichen Stand gehaltene fortgeschrittene Lehrbuch der Peptid-Biochemie! Auch für diese zweite, um ein Viertel erweitere Auflage haben die Autoren Hunderte von Publikationen gelesen und zu einem informativen und vollständigen Überblick über das Fachgebiet zusammengefasst. Nach einer Einführung in die Grundlagen der Peptidstruktur und -synthese werden die wichtigsten Familien biologisch aktiver Peptide systematisch abgehandelt. Mit interdisziplinärem Anspruch werden dann wichtige Anwendungen aus der Biotechnologie, Pharmazie und Biomedizin besprochen. Selbstverständlich werden auch Themen der Spitzenforschung berücksichtigt, zum Beispiel Pseudopeptide, Peptidmimetika und Aspekte der kombinatorischen Synthese. -- Neu in dieser Auflage sind Fragen und Übungsaufgaben, die das Nacharbeiten von Vorlesungen oder das Selbststudium erleichtern.

Book Mass Spectrometry of Proteins and Peptides

Download or read book Mass Spectrometry of Proteins and Peptides written by Mary S. Lipton and published by Humana Press. This book was released on 2014-11-27 with total page 0 pages. Available in PDF, EPUB and Kindle. Book excerpt: When the last edition of this book was published in 2000, the field of proteomics was in its infancy. At that time, multidimensional liquid chromatographic separations were being introduced as an alternative to traditional gel-based techniques for separating complex protein and peptide mixtures prior to mass spectrometric detection. Today, this approach – referred to as shotgun proteomics – is considered routine for lar- scale global analyses of protein mixtures. Now in its adolescence, proteomics is fundamentally transforming biological and medical research. Much of this transformation can be attributed to technological advancements, particularly in mass spectrometry. Much wider accessibility of hi- resolution and mass measurement accuracy instrumentation in recent years has ini- ated a new revolution in the field by providing more reliable data and shifting the focus from cataloging proteins to precisely quantifying changes in protein abundance over time and in response to stimuli. Advanced mass spectrometers and novel ion d- sociation schemes such as electron transfer/capture dissociation make it possible to venture boldly into the maze of protein posttranslational modifications, which are an integral component of understanding functional proteomics in the spatial and t- poral domains. Another area that has benefited from these advancements is top-down proteomics, an emerging method essential for characterizing various protein variants that has potentially high impact in biomedical research.

Book DEVELOPPEMENT DU COUPLAGE DE LA CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE AVEC LA SPECTROMETRIE DE MASSE PAR L INTERFACE FAB A FLUX CONTINU  CARACTERISATION DES PROTEINES H  T ET L DU COMPLEXE DE LA GLYCINE DECARBOXYLASE DES FEUILLES DE POIS

Download or read book DEVELOPPEMENT DU COUPLAGE DE LA CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE AVEC LA SPECTROMETRIE DE MASSE PAR L INTERFACE FAB A FLUX CONTINU CARACTERISATION DES PROTEINES H T ET L DU COMPLEXE DE LA GLYCINE DECARBOXYLASE DES FEUILLES DE POIS written by VERONIQUE.. LOUVET MERAND and published by . This book was released on 1994 with total page 178 pages. Available in PDF, EPUB and Kindle. Book excerpt: AU COURS DE CE TRAVAIL NOUS AVONS UTILISE DIFFERENTES TECHNIQUES DE SPECTROMETRIE DE MASSE DESTINEES A RESOUDRE DES PROBLEMES ANALYTIQUES DANS LE DOMAINE DE LA STRUCTURE DES PROTEINES. DANS LE BUT DE GAGNER DU TEMPS ET DE LA SENSIBILITE DANS LES ANALYSES, NOUS AVONS DEVELOPPE LE COUPLAGE DE LA CHROMATOGRAPHIE LIQUIDE (HPLC) AVEC LA SPECTROMETRIE DE MASSE (MS) EN MODE FAB FAST ATOM BOMBARDMENT PAR L'INTERFACE FAB A FLUX CONTINU (CF/FAB). CE COUPLAGE A ETE REALISE AVEC DES COLONNES CAPILLAIRES DE DIAMETRE INTERNE 0,25 MM. IL S'EST AVERE ETRE BIEN ADAPTE A L'ETUDE DE MELANGES COMPLEXES DE PEPTIDES DE MASSES INFERIEURES A 5000 DA AVEC UNE SENSIBILITE DE L'ORDRE DE 20 A 200 PMOL POUR UN PEPTIDE DE MASSE 1000 DA. CETTE SENSIBILITE DECROIT AU FUR ET A MESURE QUE NOUS ELEVONS DANS LE DOMAINE DE MASSE. PAR LA SUITE, LES TECHNIQUES DE COUPLAGE DE L'HPLC AVEC LA SPECTROMETRIE DE MASSE, PAR L'INTERFACE CF/FAB MAIS AUSSI PAR L'INTERFACE ELECTROSPRAY (ESI), ONT ETE UTILISEES POUR L'ETUDE DE LA STRUCTURE PRIMAIRE ET DES MODIFICATIONS POST-TRADUCTIONNELLES DES PROTEINES H, T ET L DU COMPLEXE DE LA GLYCINE DECARBOXYLASE DES MITOCHONDRIES DES FEUILLES DE POIS. AINSI, LES ANALYSES DES FRAGMENTS ISSUS DE COUPURES CHIMIQUES OU ENZYMATIQUES DES PROTEINES H (14,1 KDA) ET T (40,9 KDA) ONT PERMIS DE VERIFIER LES SEQUENCES DE CES DEUX PROTEINES ETABLIES A PARTIR DE LEURS ADNC. NOUS AVONS AUSSI LOCALISER LA POSITION EXACTE DU COFACTEUR LIPOATE DE LA PROTEINE H. LA MESURE DE LA MASSE DE LA PROTEINE L (49,7 KDA) CONFIRME LA SEQUENCE DE LA PROTEINE. DE PLUS, ELLE MONTRE QU'IL N'Y A DE LIAISON COVALENTE NI ENTRE LES DEUX SOUS UNITES DE LA PROTEINE, NI ENTRE LA PROTEINE ET SON COFACTEUR, ET QUE LA PROTEINE L CONTIENT UNE MODIFICATION POST-TRADUCTIONNELLE DE 32 DA ENVIRON

Book Peptide Characterization and Application Protocols

Download or read book Peptide Characterization and Application Protocols written by Gregg B. Fields and published by Humana Press. This book was released on 2010-11-19 with total page 342 pages. Available in PDF, EPUB and Kindle. Book excerpt: This book is dedicated to the characterization of peptides and their applications for the study of biochemical systems. The contributing authors are all leaders in the field of peptide research. Part I, Characterization, presents the most recent advances in select analytical techniques. Part II, Application, presents a variety of specific applications for synthetic peptides. This book is an indispensable aid in the pursuit of new directions in peptide research.

Book Quantification de biomarqueurs prot  iques dans des matrices biologiques complexes par spectrom  trie de masse

Download or read book Quantification de biomarqueurs prot iques dans des matrices biologiques complexes par spectrom trie de masse written by Jérémy Jeudy and published by . This book was released on 2014 with total page 0 pages. Available in PDF, EPUB and Kindle. Book excerpt: Le travail présenté ici s'est penché sur les problèmes rencontrés sur ce type d'études protéomiques, et sur les solutions qui peuvent être explorées pour améliorer le débit d'évaluation des candidats biomarqueurs. Les peptides à méthionine sont généralement évités en raison de leur sensibilité à l'oxydation. Cependant, il semblait intéressant d'étudier leur modification endogène pouvant affecter les processus biologiques. Une première évaluation de l'impact de l'oxydation des apolipoproteins dans le cas de la maladie d'Alzheimer, a permis de mettre de côté ce biomarqueur potentiel, et de faire apparaître un certain nombre de problèmes liés au prélèvement et au stockage des échantillons biologiques. L'évaluation de dispositifs DBS (Dried Blood Spot) et Vivid à partir d'un panel de 32 protéines sanguines a permis de fournir une première solution envisageable pour maîtriser ces problèmes. Par la suite, un nouveau mode de quantification des peptides appelé MRM3 a été utilisé pour dépasser la complexité de la matrice biologique, et fournir une évaluation fiable des niveaux de concentration de 2 protéines plasmatiques, la C-Reactive protein et la TIMP-1, ainsi que 2 protéines urinaires, l'aquaporin-2 et la podocin. Pour améliorer la sensibilité d'analyse et réduire les coûts de solvants nécessaires aux analyses, l'évaluation d'une plate-forme de micro-chromatographie a été réalisée par comparaison à une plate-forme narrow-bore. Cette étude a permis de mettre en évidence l'impact important de l'effet matrice sur le processus analytique, nécessitant de développer de nouvelles stratégies de travail. Enfin, afin de réduire la complexité de l'échantillon, l'évaluation de cartouches d'extraction en phase solide à base de large taille de pores a été réalisé, et un protocole développé a permis d'analyser avec succès des enzymes contenus dans un échantillon de lessive commerciale. De plus, la durée nécessaire à la préparation d'échantillons biologiques a pu être fortement réduite en combinant une digestion rapide assistée par température combinée au dessalage en ligne, afin de permettre l'analyse quantitative des protéines qu'il contient seulement quelques heures après son arrivée au laboratoire.

Book Protein and Peptide Mass Spectrometry in Drug Discovery

Download or read book Protein and Peptide Mass Spectrometry in Drug Discovery written by Michael L. Gross and published by John Wiley & Sons. This book was released on 2011-11-08 with total page 0 pages. Available in PDF, EPUB and Kindle. Book excerpt: The book that highlights mass spectrometry and its application in characterizing proteins and peptides in drug discovery An instrumental analytical method for quantifying the mass and characterization of various samples from small molecules to large proteins, mass spectrometry (MS) has become one of the most widely used techniques for studying proteins and peptides over the last decade. Bringing together the work of experts in academia and industry, Protein and Peptide Mass Spectrometry in Drug Discovery highlights current analytical approaches, industry practices, and modern strategies for the characterization of both peptides and proteins in drug discovery. Illustrating the critical role MS technology plays in characterizing target proteins and protein products, the methods used, ion mobility, and the use of microwave radiation to speed proteolysis, the book also covers important emerging applications for neuroproteomics and antigenic peptides. Placing an emphasis on the pharmaceutical industry, the book stresses practice and applications, presenting real-world examples covering the most recent advances in mass spectrometry, and providing an invaluable resource for pharmaceutical scientists in industry and academia, analytical and bioanalytical chemists, and researchers in protein science and proteomics.

Book Application du couplage chromatographie liquide spectrom  trie de masse    l   tude de la biodisponibilit   de peptides issus de produits laitiers et    la prot  omique

Download or read book Application du couplage chromatographie liquide spectrom trie de masse l tude de la biodisponibilit de peptides issus de produits laitiers et la prot omique written by François Delalande and published by . This book was released on 2003 with total page 252 pages. Available in PDF, EPUB and Kindle. Book excerpt: Le couplage chromatographie liquide-spectrométrie de masse est devenu une méthode de choix pour la quantification de molécules dans une matrice, la détermination des séquences primaires de peptides et de protéines ainsi que la mise en évidence de modifications post-traductionnelles. Les progrès réalisés tant au niveau de la LC qu'au niveau de la spectrométrie de masse ont aussi révolutionné la biologie en permettant une identification sur des quantités femtomolaires de protéines séparées par électrophorèse bidimensionelle dans le cadre d'études protéomiques et la détection toujours plus sensible de molécules d'intérêt par exemple dans les fluides biologiques (plasma, urine, LCR).Mon travail de thèse a porté sur le choix et la mise au point de stratégies instrumentales et analytiques en optimisant de façon poussée tous les paramètres du couplage LC-MS et LC-MS-MS. La première partie concerne la mise au point expérimentale de techniques de microLC-MS et microLC-MS-MS pour la caractérisation de composés peptidiques et la mesure de leur biodisponibilité. La seconde partie porte sur le développement, l'optimisation et l'utilisation de la nano-LC-MS pour l'étude protéomique avec une première étude protéomique visant à caractériser les interactions entre le riz et le rice yellow mottle virus. Ce travail a permis par les techniques MALDI-MS et LC-MS-MS, de mettre en évidence les protéines du riz recrutées par les protéines de capside du virus et l'identification des protéines différentiellement exprimées selon la variété de riz (résistant/sensible). La seconde étude protéomique concerne la caractérisation de marqueurs d'expressions liés à l'anomalie "Mantled" chez le palmier à huile faisant appel au séquençage de novo. Pour conclure, nous avons utilisé les multiples potentiels du couplage microLC-MS et nanoLC-MS-MS pour répondre à différents problèmes biologiques. Ces réponses n'ont pu être obtenues que grâce à la mise au point de méthodologie particulière.

Book D  veloppement m  thodologique en couplage nanoLC spectrom  trie de masse pour l analyse de prot  ines enti  res

Download or read book D veloppement m thodologique en couplage nanoLC spectrom trie de masse pour l analyse de prot ines enti res written by Adeline Page and published by . This book was released on 2007 with total page 53 pages. Available in PDF, EPUB and Kindle. Book excerpt: La recherche de biomarqueur dans les fluides physiologiques est actuellement un axe de recherche en plein essor. L'identification de ces protéines est cruciale pour détecter plus précocement les maladies. Actuellement l'identification de protéine est effectuée à partir de la détection de leurs peptides obtenus après digestion enzymatique. Il est cependant difficile de détecter par cette méthode tant les modifications post-traductionnelles que les protéines de petite masse moléculaire présentes à faible concentration dans un mélange biologique complexe. Le développement de nouvelles méthodes sensibles permettant d'analyser ces protéines intactes est donc nécessaire. L'objectif de ce travail a donc été de développer une nouvelle méthode de détection de protéines entières basée sur un couplage nano-chromatographie liquide / spectrométrie de masse. L'utilisation d'une nanocolonne C4 montée sur la nanoLC couplée à un spectromètre de masse à trappe ionique permet de séparer et de détecter en ligne les protéines entières. L'acquisition en mode SIM (Selected Ion Monitoring) offre une meilleure sensibilité et spécificité de détection en sélectionnant trois ions multichargés caractéristiques de la protéine. La méthode développée a ensuite été appliquée pour détecter le NGF (Nerve Growth Factor), protéine neurotrophique de 13,5 kDa, qui est un marqueur potentiel du cancer du sein. Une limite de détection de 0,1 ng/mL a été atteinte pour détecter le NGF recombinant humain. Cette méthode a permis de détecter et doser le NGF dans la lignée cellulaire cancéreuse mammaire MCF-7, ce résultat a été confirmé par une analyse à haute résolution (FTICR-MS). L'étude de sérums a mis en évidence l'importance d'éliminer avant l'analyse les protéines de forte abondance. La déplétion des protéines majoritaires par immunoaffinité a permis d'analyser les échantillons de sérums de souris ou de patientes atteintes d'un cancer du sein, pour y détecter le NGF. Ces résultats montrent la possibilité d'utiliser le couplage nanoLC - spectrométrie de masse en protéine entière pour détecter un nouveau marqueur potentiel du cancer du sein. Cette méthode pourra être également appliquée à d'autres pathologies.